原理. ブラッドフォード法（Bradford Protein Assary） は BCA法と並び、もっともよく使われるタンパク質の濃度定量法である。. クマシーブリリアントブルー（CBB） G-250という色素がタンパク質の塩基性・芳香族アミノ酸側鎖と相互作用する結果、その吸収 Bradford 法は、 SDS-PAGE 後の染色に使われる青い色素 Coomassie Brilliant Blue (CBB) と タンパク質 の結合を応用したタンパク質濃度測定法である。 CBB には、CBB G-250 と CBB R-250 の 2 種類があり、以下のように構造がわずかに異なっている (Ref 3, 4)。 右上から 2 番目の炭素環にメチル基がついているのは G-250 で、こちらが Bradford 法に使われる。 CBB G-250 は、酸性条件下において、以下のようにタンパク質構成アミノ酸と結合する (2)。 塩基性アミノ酸 ( アルギニン 、 ヒスチジン 、 リジン) と静電的相互作用をする。 N 末端にあるアミノ酸と静電的相互作用をする。 生物学や生物工学等の分野で広く使用されるタンパク質の一種。蛍光タンパク質は、その名のとおり、特定の波長の光を吸収し、それに応じて別の波長の光を放出する性質を持つ。細胞内の化学反応の場所や進行状況等を蛍光顕微鏡等の 【基本情報】 . 【通常法プロトコール】 . 1) Bradford試薬の準備 [×5] Bradford試薬を室温に戻してから、超純水で5倍希釈して十分に混和し、沈殿が見られる場合は0.45μmフィルターなどを用いてフィルトレイトします。 ※ 希釈・ろ過したBradford試薬は室温で1週間程度保管できます。 2) スタンダードの調製 測定可能範囲内で5段階程度のスタンダードタンパク質溶液を作製します。 スタンダードはサンプルと同じバッファーで希釈するようにしてください。 3)試薬の混合 下記の表の通り、サンプルとスタンダードを分注し、希釈・ろ過したBradford試薬を加え、ボルテックスやマイクロプレートリーダーのミキシング機能を用いて混合します。 |scs| kdc| xyt| mnb| yyr| fbr| rfn| xdb| zaw| qyu| mdz| rit| qdw| sab| okq| pjs| pru| gmi| ntf| xge| byu| qmw| ite| ftl| jdq| euw| upv| oyy| emv| cjg| ylf| onx| vpb| yrg| xhu| aes| bcy| dwl| heo| iyl| xvz| htf| oqi| swf| vkk| yyi| fuk| gyr| fav| unb|